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MOC1細胞系

MOC1細胞系

產(chǎn)品時(shí)間:2024-06-06

簡(jiǎn)要描述:

MOC1細胞系產(chǎn)品和服務(wù)給予高度贊許,非常感謝廣大用戶(hù)多年來(lái)的信任與支持,我們將一如既往的堅持研發(fā)高質(zhì)量產(chǎn)品為本!

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MOC1細胞系

MOC1細胞系

T150燒瓶 : 07-200-64

T75燒瓶 : 10-126-37

: 03-374-059

45um過(guò)濾器 : 09-754-21

05% : sh30236.01

25% : sh30042.01

惰性譜線(xiàn) : MOC1,22

侵略性線(xiàn) : MOC2

IMDM : sh30228.02 Hams

營(yíng)養混合物 : F10-F12sh30026.01胎牛血清,特征-??寺?/p>

目錄 / 批次號 :  sh30071.03 / AWK24001

過(guò)濾1L過(guò)濾器瓶的過(guò)濾器 :  09-761-108

科學(xué)試劑目錄編號 :  胰島素:I6634-50mgH0135-1mg???

EMD微孔試劑目錄編號 :  表皮生長(cháng)因子(EGF),重組人:01-107


細胞系特征

1. 惰性- MOC1:基于體內研究的侵襲性較低。如果從80%合流T150通過(guò)1:12,需要2-4天才能達到80%合 流。與更具侵襲性的細胞系相比,MOC1細胞系:在收獲時(shí)需要的時(shí)間更長(cháng)。

2. 侵襲性- MOC2:基于體內研究,更具侵襲性。如果從80%合流T150通過(guò)1:12,需要2-4天才能達到 80%合流。與惰性細胞系相比,惰性細胞系更容易從燒瓶中分離出來(lái)。


從T150收集和傳遞細胞/80%融合

1. 將T150中的介質(zhì)倒入傾倒瓶中

2. 用10-20ml PBS清洗一次。倒出PBS清洗液。

3. 加入1.5ml 0.05%覆蓋整個(gè)表面積,從而接觸所有細胞(這樣做,使細胞不會(huì )暴露在),,然后再應用1。

4. 放置在37C培養箱中。侵襲性細胞系孵育3-4分鐘,惰性反應可達10-12 min,但在6-8 min后 檢查。

5. 故意敲擊燒瓶一側的手掌幾次,使細胞松動(dòng)。

6. 在顯微鏡下檢查,看細胞在培養基中是否能自由漂浮。如果大多數沒(méi)有,請放回37C培養箱中 再放置3-5分鐘。盡量不要讓細胞留,因為這樣會(huì )殺死細胞。

7. 一旦所有或大部分細胞漂浮,加入10ml IMDM MOC線(xiàn)培養基來(lái)中和反應。

8. 移液管培養基和細胞從燒瓶中進(jìn)入15ml的錐形細胞到顆粒細胞。離心機,1000 RPM x 5 min。

9. 倒出上清液。

10. 以1:12的速度通過(guò)細胞-在另外12毫升的培養基中重懸細胞。

11. 從其中取出1ml,放入新的T150燒瓶中,總體積為22ml的IMDM MOC系培養基(稀釋1:12)

12. 放回37C的培養箱中生長(cháng)。應在2-4天內達到80%的合流率。


冷凍細胞系

1. 從T150中收集細胞,如下圖所示

2. 在15ml錐形管中旋轉成顆粒(1000 RPM x5分鐘)

3. 排出上清液

4. 點(diǎn)擊15ml圓錐形管,重懸細胞

5. 加入1.5ml IMDM MOC系培養基,在培養基中重建細胞-保持冰上

6. 管入冰時(shí)緩慢加入1.5 ml冷凍介質(zhì)(在IMDM MOC線(xiàn)介質(zhì)中制作冷凍介質(zhì)-20%DMSO。例:20ml庫存-加入16ml IMDM MOC線(xiàn)培養 基和4ml DMSO。注射器過(guò)濾器,使用um過(guò)濾器

7. 每份1毫升到3個(gè)冷凍瓶

8. 在-80攝氏度內儲存不超過(guò)2周

9. 在1-2周內放入液氮溶液中

注:如果需要,可增加到2ml IMDM和2ml冷凍培養基,以?xún)Υ嬖?個(gè)小瓶中。此外,在冷凍細胞 前計數細胞并記錄在小瓶上。


解凍細胞系

1. 在解凍前,將21ml IMDM MOC線(xiàn)培養基加入到T150中(如果想解凍成T75,則將10ml加入到T75 中)

2. 將液氮從冷凍瓶中取出,噴上含有70%酒精的小瓶進(jìn)行清洗。

3. 將冷凍瓶的下半部分放在37攝氏度的水浴中(不讓蓋子接觸水,以避免污染),直到 有一小塊冰漂浮著(zhù)。

4. 再次用ETOH噴灑冷凍瓶,然后放在引擎蓋上。將1ml培養液移液管加入到1ml細胞中,并將這 些2ml加入到已經(jīng)含有培養基的T150中(使一個(gè)T150總共有22ml)。

5. 在T150燒瓶中取一些培養基,沖洗冷凍瓶,然后平板放置,以確保所有殘留的細胞都留在冷 凍瓶中。


注入小鼠側腹(異位)所需細胞濃度:

MOC1:MOC22:(用0.15ml注射1e6細胞)=6.66e6細胞/ml

MOC2:(用0.15ml注射1e5細胞)=6.66e5細胞/ml

1. 用0獲取細胞。如上所述。

2. 用IMDM MOC系培養基,將細胞旋轉成50ml錐形的顆粒(1000 RPM x5分鐘)。 注:使用50ml錐形,允許小尺寸針抽出細胞供注射。

3. 再次將細胞旋轉成小顆粒。倒出PBS上清液(不)。在計算體積的冰PBS中重懸顆粒以達到 適當的濃度,記住灌注上清后50ml錐形中還有 200ul。

4. 將50ml錐形冰轉移,每只小鼠皮下注射0.15ml(150ul)細胞。

5. 按照標準協(xié)議注入鼠標。我們用1毫升注射器。我們用1.5英寸21號針繪制細胞,并將針切換 到?英寸26號針進(jìn)行注射。

6. 用10ml冰水PBS重懸細胞顆粒(確保盡可能多地去除含有FCS的介質(zhì)),再次將細胞旋轉成顆 粒(1000 RPM x5分鐘)

7. 用3-6 ml冰PBS重懸細胞顆粒再次清洗細胞(體積取決于顆粒的大小,因為你將使用這個(gè)體積 來(lái)計數細胞)

8. 使用血細胞計數儀或自動(dòng)細胞計數器計數每毫升的細胞,使用臺盼藍來(lái)消除死亡細胞。使用 存在的細胞總數(細胞/mlx總PBS的mlPBS),計算重懸細胞顆粒所需的體積,以達到6.66e6(MOC1,MOC22)或6. 66e5 cell/ml(MOC2)濃度。

例如:MOC1的細胞計數為: 2.8e6細胞/mlx5ml(PBS)=14e6細胞總數。14e6細胞/ 6.66e6細胞/ml=2.1mlPBS將細胞顆粒懸浮在其中。


1L媒體協(xié)議

將培養基為2:1 IMDM制成營(yíng)養混合物

1. 解凍胎牛血清和賓州/鏈球菌在37攝氏度

2. 1L過(guò)濾瓶加入626ml IMDM和313ml營(yíng)養混合物

3. 添加50毫升FCS

4. 添加10ml Penn流

5. 過(guò)濾器

6. 加入1ml5mg/ml胰島素(或500ul,10mg/ml)

注:用10ml無(wú)菌H20稀釋胰島素50mg粉末,加50ul無(wú)菌1N鹽酸,4C箔保存

7. 加入40ug

注:8. 添加5ug EGF

注:使EGF - make 1ug/ul原液用無(wú)血清IMDM稀釋?zhuān)可尤?ul。在-80處存儲等分。

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